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細胞培養(yǎng)的成敗關鍵在于無菌操作
點擊次數(shù):313 更新時間:2023-01-10

無菌操作是決定細胞培養(yǎng)成敗的關鍵因素,即便使用設備完善的實驗室,若實驗者粗心大意,操作不規(guī)范,也會導致污染。因此,所有操作都要最大可能的保證無菌,每一項工作都必須做到有條不紊和wan全可靠。

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1、實驗進行前:在開始實驗前要制定好實驗計劃和操作程序。有關數(shù)據(jù)的計算要事先做好。根據(jù)實驗要求,準備各種所需器材和物品、清點無誤后將其放置操作場所(培養(yǎng)室、超凈臺)內(nèi),然后開始消毒。這可以避免開始實驗后,因物品不全往返拿取而增加污染機會。

2、無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70% ethanol 擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。細胞培養(yǎng)實驗操作應在抬面之中央無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。

3、 小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

4、工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol 之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO 及TPA 等,并避免尖銳針頭之傷害等。

5、定期檢測下列項目

(1)CO2 鋼瓶的CO2 壓力;(2) CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染(水盤的水用無菌水,每周更換); CO2 培養(yǎng)箱定期消毒;(3) 無菌操作臺內(nèi)氣流壓力是否正常,定期更換紫外線燈管及HEPA 過濾膜,預濾網(wǎng)(300 小時/預濾網(wǎng),3000 小時/HEPA)。

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