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牛β羥丁酸(βOHB)酶聯(lián)試劑盒檢測(cè)說(shuō)明書(shū)資料
點(diǎn)擊次數(shù):1526 更新時(shí)間:2014-12-19

牛β羥丁酸(βOHB)酶聯(lián)試劑盒檢測(cè)說(shuō)明書(shū)資料
本試劑盒僅供研究使用。
檢測(cè)范圍 : 96T
0.8μmol/L - 24μmol/L
使用目的 :
本試劑盒用于測(cè)定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中β羥丁酸(β-OHB)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中牛β羥丁酸(β-OHB)水平。用純化的牛β羥丁
酸(β-OHB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入β羥丁酸(β
-OHB),再與 HRP 標(biāo)記的β羥丁酸(β-OHB)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)
過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)
化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的β羥丁酸(β-OHB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm
波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值) ,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中牛β羥丁酸(β-OHB)濃度。
試劑盒組成
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1 瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品(48μmol/L) 0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8 條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說(shuō)明書(shū)  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張
6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(gè)
標(biāo)本 要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋: 本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支, 用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
24μmol/L  5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150?l 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μmol/L  4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150?l 的 5 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μmol/L  3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150?l 的 4 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μmol/L  2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150?l 的 3 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μmol/L  1 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品  150?l 的 2 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150?l 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測(cè)樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50?l, 待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40?l,
然后再加待測(cè)樣品 10?l(樣品zui終稀釋度為 5 倍) 。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.  溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4.  配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50?l,空白孔除外。
7.  溫育:操作同 3。
8.  洗滌:操作同 5。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50?l,再加入顯色劑 B50?l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50?l,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色) 。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD 值) 。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié) :
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式, 將樣品的 OD 值代入方程式, 計(jì)算出樣品濃度, 再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實(shí)際濃度。
注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的 OD 值) ,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,計(jì)
算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存: ;2-8℃。
2.有效期:6 個(gè)月

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