封閉血清用于免疫組化(IHC)或者免疫熒光(IF)實(shí)驗(yàn)中樣本的封閉,降低背景,減少假陽性。遠(yuǎn)慕提供多種屬封閉血清,液體形式產(chǎn)品(原液),無需溶解,用PBS直接稀釋即可使用,低防腐劑含量,對細(xì)胞和蛋白的毒性/影響更小。
什么是封閉血清
封閉血清就是將養(yǎng)殖的非免疫的正常動物采血,然后不加抗凝劑,血液凝固,血kuai收縮,析出的淡黃色液體。經(jīng)過特殊工藝處理后的血清,特別適在各類免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中用于封閉處理, 比如:IHC、IF/ICC、ELISA等。
血清與血漿的區(qū)別
血漿是指血液中除去細(xì)胞成分后剩下的淡黃色或無色半透明液體,一般需要經(jīng)過抗凝處理 。血清與血漿的區(qū)別在于血清中不含某些在凝血過程中被消耗的凝xue因子如纖維蛋白原,增添了在血液 凝固過程中由血管內(nèi)皮細(xì)胞和血小板所釋放的化學(xué)物質(zhì)。
正常驢血清
正常山羊血清
正常兔血清
正常大鼠血清
正常小鼠血清
特點(diǎn):
用于免疫組化(IHC)或者免疫熒光(IF)實(shí)驗(yàn)中樣本的封閉,降低背景,減少假陽性。
液體形式產(chǎn)品(原液),無需溶解,用PBS直接稀釋即可使用,低防腐劑含量,對細(xì)胞和蛋白的毒性/影響更小。
為什么需要封閉
封閉步驟可減少一抗和二抗與非靶標(biāo)位點(diǎn)進(jìn)行非特異性結(jié)合時所產(chǎn)生的本底信號。理想情況是,封閉劑將占據(jù)樣本中的“黏性"位點(diǎn),比如暴露的帶電性或疏水性蛋白表面,同時不會干擾一抗/二抗識別靶表位,從而盡可能提高信噪比(S/N)。
封閉血清效果
封閉血清適用于免疫組化或者免疫熒光實(shí)驗(yàn)中樣本的封閉??梢苑忾]待檢樣本中與蛋白質(zhì)非特異性結(jié)合的位點(diǎn),另外還可以封閉樣品中內(nèi)源性的Fc片段結(jié)合位點(diǎn),阻斷抗體與樣品中的Fc受體結(jié)合,從而降低背景,減少假陽性。對于適用多抗的實(shí)驗(yàn),二抗種屬來源的正常血清是封閉處理的金標(biāo)準(zhǔn)。
封閉血清使用方法
推薦用PBS將封閉血清原液稀釋5-20倍,配成5%-20%的工作液,直接滴加在組織切片或者細(xì)胞涂片上,37℃度孵育10-30分鐘,清除血清,勿洗,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗工作液,37℃孵育1-2h或4℃過夜。
遠(yuǎn)慕實(shí)用Tips:
最佳的稀釋比例需研究者通過實(shí)驗(yàn)來確定。建議的起始稀釋比例如下:IHC-p(1:10-20);IF / ICC(1:10-20);ELISA(1:100)。
封閉用血清中不能含有目標(biāo)蛋白,且與一抗來源不同,可用與二抗相同來源的封閉血清。
封閉結(jié)束后,用濾紙吸去血清,不洗,直接滴加一抗。
每張切片需要量,可以參考50ul PBS + 5ul 血清 來計算。
如何如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損:
將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時間儲存在2~8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。如果開蓋后未使用完,我們建議存放于4℃,但請勿超過一個月。