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液體培養(yǎng)基中細菌培養(yǎng)實驗步驟
點擊次數(shù):604 更新時間:2023-11-15

  實驗步驟

  一、過夜培養(yǎng)

  1.  將5 ml預熱的液體培養(yǎng)基移入一無菌的16 mm或18 mm管中。

  2.  用接種環(huán)挑一個單菌落,浸沒于培養(yǎng)液中并輕輕振動接種環(huán),使待接種的細菌分散在培養(yǎng)液中。

  3.  蓋好試管,在搖床或轉(zhuǎn)鼓式培養(yǎng)裝置上以60 r/min速度,于37°C培養(yǎng)至飽和(1X109~ 2X109 細胞 /ml,>6 h)。

  二、大體積培養(yǎng)

  1.  在一無菌的Erlenmeyer或baffle瓶中,用新鮮預熱的培養(yǎng)液按I1: 100的比例稀釋過夜培養(yǎng)物,燒瓶的體積應(yīng)該是培養(yǎng)液體積的5倍以上。

  如果不搖動培養(yǎng),所用燒瓶的體積應(yīng)比培養(yǎng)液體積大20倍以上,以確保足夠的通氣。

  2.  37°C,劇烈搖動培養(yǎng)(約300 r/min)。

  三、利用計數(shù)板監(jiān)測生長情況

  1.  用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計數(shù)玻片(或者血球計)。

  2.  小心地將一小滴培養(yǎng)液滴到蓋玻片的邊緣,這樣培養(yǎng)液可擴散人蓋玻片下。

  3.  在相差顯微鏡400倍下觀察,并且按一個小方塊中所見的每個細菌大約相當于2X107 細胞/ml計算細菌濃度。

  四、利用分光光度計監(jiān)測生長情況

  因為儀器的差異性,分光光度計應(yīng)該用一已知濃度的培養(yǎng)液進行校準。

  1.  測OD600。為了獲得一個準確的讀數(shù),稀釋培養(yǎng)液至OD600<1。

  2.  按每0. 1 OD值大約相當于108 細胞/ml計算細菌濃度。

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