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實(shí)驗(yàn)室常用多種緩沖液配置方案
點(diǎn)擊次數(shù):390 更新時(shí)間:2023-10-13

1、1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

組份濃度:1 M Tris-HCl

配制量:1 L

配制方法:

1. 稱量121.1 g Tris置于1 L燒杯中。

2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br/>
3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。

PH值     濃HCl

7.4     約70ml

7.6     約60ml

8.0     約42ml

4. 將溶液定容至1 L。

5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。

注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。

2、10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

組份濃度:100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

配制量:1 L

配制方法:

1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。

1M Tris-HCl Buffer(PH7.4,7.6,8.0)     100ml

500mM EDTA(PH8.0)     20ml

2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,均勻混合。

3. 將溶液定容至1 L后,高溫高壓滅菌。

4. 室溫保存。

3、1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

組份濃度:1.5 M Tris-HCl

配制量:1 L

配制方法:

1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。

2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br/>
3. 用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至8.8。

4. 將溶液定容至1 L。

5. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。

注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。

4、3 M 醋酸鈉(pH5.2)


組份濃度:3M 醋酸鈉

配制量:100ml

配制方法:

1.稱量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml燒杯中,加入月40ml的去離子水?dāng)嚢枞芙?br/>
2.加入冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.2

3.加去離子水將溶液定容至100ml

4高溫高壓滅菌后,室溫保存。

5、PBS Buffer

組份濃度:137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

配制量:1 L

配制方法:

1. 稱量下列試劑,置于1 L燒杯中。

NaCl     8g

KCl     0.2g

Na2HPO4     1.42g

KH2PO4     0.27g

2. 向燒杯中加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?br/>
3. 滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至7.4,然后加入去離子水將溶液定容至1 L。

4. 高溫高壓滅菌后,室溫保存。

注意:上述PBS Buffer中無二價(jià)陽離子,如需要,可在配方中補(bǔ)充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

6、10 M 醋酸銨

組份濃度:10 M 醋酸銨

配制量:100 ml

配制方法:

1. 稱量77.1 g醋酸銨置于100~200 ml燒杯中,加入約30 ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?br/>
2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm濾膜過濾除菌。

4. 密封瓶口于室溫保存。

注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓滅菌。

7、苯ben酚/lv仿/yi戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法:

1. 說明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯ben酚/lv仿/yi戊醇(25 : 24 : 1)。lv仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。

2. 配制方法:將Tris-HCl平衡ben酚與等體積的lv仿/yi戊醇(24 : 1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8、10% (W/V) SDS

組份濃度:10% (W/V)SDS

配制量:100ml

配制方法:

1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水,68℃加入溶解

2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2

3.將溶液定容至100ml后,室溫保存。

9、2 N NaOH

組份濃度:2 N NaOH

配制量:100 ml

配制方法:

1. 量取80 ml去離子水置于100~200 ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。

2. 稱取8 g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。

3. 待NaOH完wan全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100 ml。

4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。

10、2.5 N HCl


組份濃度:2.5 N HCl

配制量:100 ml

配制方法:

1. 在78.4 ml的去離子水中加入21.6 ml的濃鹽酸(11.6 N),均勻混合。

2. 室溫保存。

11、5 M NaCl

組份濃度:5 M NaCl

配制量:1 L

配制方法:

1. 稱取292.2 g NaCl置于1 L燒杯中,加入約800 ml的去離子水后攪拌溶解。

2. 加去離子水將溶液定容至1 L后,適量分成小份。

3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。

12、20% (W/V) Glucose

組份濃度:20% (W/V) Glucose

配制量:100 ml

配制方法:

1. 稱取20 g Glucose置于100~200 ml燒杯中,加入約80 ml的去離子水后,攪拌溶解。

2. 加去離子水將溶液定容至100 ml。

3. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。

13、Solution I(質(zhì)粒提取用)

組份濃度:25 mM Tris-HCl(pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

配制量:1 L

配制方法:

1. 量取下列溶液,置于1 L燒杯中。

1M Tris-HCl(PH8.0)     25ml

0.5M EDTA(PH8.0)     20ml

20%Glucose(1.11M)     45ml

dH2O     910ml

2. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

14、Solution II(質(zhì)粒提取用)

組份濃度:200mM NaOH,1%(W/V)SDS

配制量:500ml

配制方法:

1.量取下列溶液,置于500ml燒杯中

10% SDS 50ml

2N NaOH 50ml

2.加滅菌水定容至500ml,充分混勻

3.室溫保存,此溶液保存時(shí)間最好不要超過一個(gè)月

注意:SDS易產(chǎn)生氣泡,不要劇烈攪拌

15、Solution III(質(zhì)粒提取用)

組份濃度:3 M KOAc, 5 M CH3COOH

配制量:500 ml

配制方法:

1. 稱量下列試劑,置于500 ml燒杯中。

KOAc                      147g

CH3COOH     57.5ml

2. 加入300 ml去離子水后攪拌溶解。

3. 加去離子水將溶液定容至500 ml。

4. 高溫高壓滅菌后,4℃保存。

16、0.5 M EDTA(pH8.0)

組份濃度:0.5 M EDTA

配制量:1 L

配制方法:

稱取186.1 g Na2EDTA·2H2O,置于1 L燒杯中。

2. 加入約800 ml的去離子水,充分?jǐn)嚢琛?br/>
3. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值至8.0(約20 g NaOH)。

注意:pH值至8.0時(shí),EDTA才能完wan全溶解。

4. 加去離子水將溶液定容至1 L。

5. 適量分成小份后,高溫高壓滅菌。

6. 室溫保存。

17、1 M DTT

組份濃度:1 M DTT

配制量:20 ml

配制方法:

1. 稱取3.09 g DTT,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2),溶解后使用0.22 mm濾器過濾除菌。

3. 適量分成小份后,-20℃保存。

18、10 mM ATP


組份濃度:10 mM ATP

配制量:20 ml

配制方法:

1. 稱取121 mg Na2ATP·3H2O,加入到50 ml塑料離心管內(nèi)。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0),攪拌溶解。

3. 適量分成小份后,-20℃保存。

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