培養(yǎng)細胞生長減慢這種情況可能的原因包括:
1.由于更換了不同培養(yǎng)液或血清,細胞需要重新適應。
2.試劑保存不當,培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨/酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。
3.培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染。
4.接種細胞起始濃度太低。
5.細胞已老化。
6.支原體污染。
建議解決方法:
1.比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分,比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液。
2換入新鮮配制培養(yǎng)液,或補加谷氨/酰胺及生長因子。
3.用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),如發(fā)現(xiàn)污染,更換培養(yǎng)物。
4.培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存。含血清完/全培養(yǎng)液在2-8℃保存,并在2周內(nèi)用完。
5.增加接種細胞起始濃度。
6.換用新的保種細胞。
7.隔離培養(yǎng)物,檢測支原體。清潔支架和培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染,更換新的培養(yǎng)物。
培養(yǎng)細胞死亡的原因:
常見的可能原因是細胞傳代時,消化過度,細胞嚴重受傷。如經(jīng)驗不足,細胞傳代消化時,在顯微鏡下觀察,至細胞變圓、脫壁,加入含血清的培養(yǎng)液,終止消化。其他原因包括長途運輸,細胞在不適宜的溫度下時間過長;培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分消耗殆盡,沒有及時換液。如果原來細胞狀態(tài)較好,換液后細胞死亡,應考慮是培養(yǎng)液及血清的質(zhì)量。-好事先已證明培養(yǎng)液及血清質(zhì)量良好。