微生物操作中常見問題的討論與分析

1、 劃線獲得單個菌落的方法。劃不出單個菌落的原因：

(1) 平板上有過多的水分；

(2) 劃線時接種環(huán)未經(jīng)反復(fù)灼燒；

(3) 多區(qū)劃線，三區(qū)或四區(qū)劃線。

2、 涂布和傾注的區(qū)別：

涂布利于觀察，但由于涂布棒上會帶有少量的菌液，可能影響計數(shù)的準(zhǔn)確性；傾注更為準(zhǔn)確，但不利于觀察菌落的狀態(tài)。

3、 培養(yǎng)基配制時應(yīng)注意的問題：

(1)滅菌溫度要嚴(yán)格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養(yǎng)基溫度不應(yīng)太高，過高會導(dǎo)致糖分焦化，影響質(zhì)量；

(2)瓊脂培養(yǎng)基不能反復(fù)溶化。反復(fù)溶化會破壞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分；

(3)培養(yǎng)基不能反復(fù)滅菌，反復(fù)滅菌也會導(dǎo)致營養(yǎng)成分的破壞；

(4)含瓊脂的培養(yǎng)基滅菌后，要搖勻。

4、 平板的保存：

大多數(shù)平板如 VRBA、DC、尿素酶生化管、顯色系列等要避光低溫保存。

5、 產(chǎn)品的保存：

(1) 干粉培養(yǎng)基：避光干燥，結(jié)塊后不能使用。

(2) 亞碲酸鉀卵黃增菌液、50%卵黃乳液等：冷凍保存，使用時，要常溫解凍，避免水浴加熱。

(3) 抗生素類：冷藏保存，溫度過高會導(dǎo)致靈敏度的下降。

(4) 兔血漿：冷藏保存少量的紅色不會影響結(jié)果。

6、 觀察時間的掌握：

按 SN、GB 等標(biāo)準(zhǔn)或培養(yǎng)基的使用說明所述時間進(jìn)行觀察，時間過短或時間過長，單菌落的特征都不會很明顯。如單增李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基，時間短單菌落看不到卵磷/脂環(huán)，時間長綿羊李氏菌也會產(chǎn)生沉淀環(huán)。OXA、PALCAM的觀察也如此，時間過長，李氏菌使整個平板成黑色，不利于觀察單個菌落。

7、 添加劑的添加：

(1)溫度的掌握。卵黃和抗生素類添加的溫度都不應(yīng)太高。

(2)定量。過多會抑制一些目標(biāo)菌，太少又導(dǎo)致雜菌的過度生長。

8、 培養(yǎng)溫度的掌握：

(1)真菌類。25-28℃培養(yǎng)

(2)細(xì)菌類。李氏菌在增菌和生化中要求培養(yǎng)溫度在 30℃左右。

(3)其他一般在 36℃左右。

9、 接種方法：

常用的方法主要有劃線、三點(diǎn)接種、穿刺接種、傾注接種、涂布接種、液體接種。

10、革蘭氏染色方法：

染色時間的掌握、沖洗的方法。

11、生化實(shí)驗(yàn)：

(1)接種的方法

(2)氧化型和發(fā)酵型實(shí)驗(yàn)操作

(3)陽性菌種的對照

(4)接種前的純化。挑取單個菌落進(jìn)行一系列的生化。

12、關(guān)于殺菌的幾個概念：

(1)抑制：是在亞抑制劑量因子作用下導(dǎo)致微生物生長停止，但在移去這些因子后生長仍可以恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

(2)死亡：在致死劑量因子的作用下或在亞致死劑量因子長時間的作用下，導(dǎo)致微生物生長能力不可逆喪失，即使移去這種因子后生長仍不能恢復(fù)的生物學(xué)現(xiàn)象。

(3)防腐：在某些化學(xué)物質(zhì)或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生長的一種措施，它能防止食物腐/敗或防止食物霉變。

(4)消毒：利用某種方法殺死或滅活物質(zhì)或物體中所有/病原微生物的一種措施，它可以起到防止感染和傳播的作用。

(5)滅菌：利用某種方法殺死物體中包括芽孢在內(nèi)的所有/病原微生物的一種措施。