DNA合成阻斷法:選用DNA合成抑制劑,可逆地抑制DNA合成,而不影響其他時期細(xì)胞的運轉(zhuǎn),最終可將細(xì)胞群阻斷在S期或G1/S交界處。羥基/脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度AdR(脫氧腺苷)、GdR(脫氧鳥苷)和TdR,均可抑制DNA合成,使細(xì)胞同步化。
其中高濃度TdR對S期細(xì)胞的毒性較小,因此常用TdR雙阻斷法誘導(dǎo)細(xì)胞同步化:在細(xì)胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)基中加入過量TdR-(Hela細(xì)胞系,2mol/L;CHO細(xì)胞系,7.5mol/L),S期細(xì)胞被抑制,其他細(xì)胞繼續(xù)運轉(zhuǎn),最后停在G1/S交界處,棄去TdR,洗滌細(xì)胞并加入新鮮培養(yǎng)液,細(xì)胞又開始分裂。當(dāng)釋放時間大于Ts時,所有細(xì)胞均脫離S期,再次加入過量TdR,細(xì)胞繼續(xù)運轉(zhuǎn)至G1/S交界處,被過量TdR抑制而停止。
該方法的優(yōu)點是同步化程度高,適用于任何培養(yǎng)體系,可將兒乎所有的細(xì)胞同步化。
缺點是產(chǎn)生非均衡生長現(xiàn)象,個別細(xì)胞體積增大。