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細胞培養(yǎng)基常見成分及作用功能介紹
點擊次數(shù):491 更新時間:2022-06-08

能量來源

每一個生長培養(yǎng)基都需要碳源,以供細胞新陳代謝。碳源通常是葡萄糖,但也可以是其他糖類,如半乳糖、己糖、果糖或其他碳源(如丙酮酸,谷氨/酰胺)。葡萄糖通常以終濃度為5.5 mM的含量添加,大約等于人體血液中的葡萄糖水平。然而,你可以購買葡萄糖濃度變化范圍很廣的培養(yǎng)基來滿足你的具體需求。你甚至可以購買不含葡萄糖的培養(yǎng)基,然后自己定制濃度,模擬高糖的糖尿病狀況,或者研究低糖應(yīng)激反應(yīng)。

 

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緩沖液

細胞需要一種特殊的pH值從7.2到7.4,否則它們無法最好地發(fā)揮細胞功能,以供生長和存活。在二氧化碳含量較高的培養(yǎng)器中,二氧化碳與水發(fā)生反應(yīng),產(chǎn)生氫離子,使培養(yǎng)基酸化。為了中和二氧化碳產(chǎn)生的酸度,并在培養(yǎng)基中保持最佳pH值,大多數(shù)培養(yǎng)基都使用化學(xué)緩沖系統(tǒng)。然而,一些緩沖方法會干擾細胞生長。

哺乳動物細胞最常見的緩沖系統(tǒng)是碳酸/氫鈉,生物影響最小。碳酸/氫鈉與氫離子反應(yīng)生成二氧化碳,隔離它們以保持pH值。然而,碳酸/氫鈉的一個缺點是,它在生理pH值上不是最佳的緩沖效果。為了避免這個問題,研究人員經(jīng)常使用替代品,如HEPES,增加某些培養(yǎng)基類型的緩沖能力。

酚紅

由于維持pH值對細胞培養(yǎng)至關(guān)重要,許多培養(yǎng)基配方包括一種名為酚紅的pH指示劑,其在酸性條件下變黃(< 6.8),在基本條件下呈粉紅色(> 8.2)。雖然通常不是問題,但酚紅可以模擬雌激素,因此,當(dāng)培養(yǎng)表達雌激素受體的細胞類型時,通常被排除在外。沒有酚紅的培養(yǎng)基可以用于比色測定,如MTT細胞增殖實驗,苯/酚的色譜可能會干擾光譜光度測量的讀數(shù),從而使結(jié)果混淆。

血清

對許多培養(yǎng)體系來說,一個重要組成部分是血清,通常是胎牛血清,稱為FBS。血清來自于血液,是糖、鹽、脂類、生長因子等許多成分的混合物。由于它的生物來源,很難維持再生性,因為每一批血清都是獨1無2的。為了規(guī)避這一問題,一些實驗室使用化學(xué)定義的血清替換物,一些實驗室則購買一整批次的特定的血清,以確保一致的結(jié)果。

代謝物,維生素和礦物質(zhì)

DMEM的成分列表主要分為三大類:氨基酸、維生素/輔因子和無機鹽(包括鈣和鎂)。許多這些成分在所有細胞培養(yǎng)基中都是常見的,而精確的組合和濃度已經(jīng)對細胞生長進行了優(yōu)化。盡管如此,許多實驗室還是選擇用額外的非必需氨基酸補充他們的培養(yǎng)基,以防止細胞使用葡萄糖或谷氨/酰胺來合成。此外,一些公司生產(chǎn)無鎂和鈣的培養(yǎng)基用于特定的研究,選擇時請仔細查看。

抗生素

很多實驗室都在他們的細胞培養(yǎng)中加入抗生素,以防止不需要的細菌或真菌的生長,即使是無菌工作。最/常用的抗菌補充劑是青/霉素和鏈/霉素(pen / strep)的組合,在完整細胞培養(yǎng)基中,終濃度為青/霉素50-100 IU/ mL和鏈/霉素50 -100 g/ mL。然而,一些實驗室選擇不使用抗生素,因為抗生素會對細胞產(chǎn)生不必要的影響,或者可以掩蓋低水平的細菌污染。根據(jù)需要,你可以決定是否在培養(yǎng)基中使用抗生素。

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