實(shí)驗(yàn)概要

速凍，是將樣品快速用干冰或液氮保存于-70°C或更低的溫度中。速凍能夠達(dá)到和緩慢控速冷凍相同的目的，效果大約為  -10-1000°C/min，但達(dá)不到-1°C  /分鐘。用CoolRack?液速凍樣本能夠保持樣本體積的穩(wěn)定、組織結(jié)構(gòu)完整、恒定的凍結(jié)參數(shù)，快速免提樣本是能避免丟失或污染的樣品。在預(yù)冷CoolRack的前提下進(jìn)行速凍，這能確保傳熱快。這種方法可以提供優(yōu)良的標(biāo)本的完整性和各類分析選擇，包括在研究和診斷中蛋白質(zhì)、DNA和RNA的提取。本實(shí)驗(yàn)提供長時(shí)間冷凍細(xì)菌的常規(guī)方法。

主要試劑

細(xì)菌樣品

冷凍保護(hù)劑

TrueCoolTM冷凍管

主要設(shè)備

CoolBoxTM CFT30

CoolRack? CFT30

CoolRack?的CF

Cryolabels和/或cryomarkers

ThermalTrayHP平臺(tái)（可選）

CoolSinkTM BX50（可選）

37℃水浴鍋

-80℃冷凍冰箱 

實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)菌樣品的準(zhǔn)備

遵照細(xì)菌的生長和制備實(shí)驗(yàn)室的方法。

參照CDC（疾病控制和預(yù)防中心）的指導(dǎo)方針，特定病原體利用BSL標(biāo)準(zhǔn)（生物安全等級(jí)）。病原體具有傳染性，應(yīng)在一個(gè)可控和安全的環(huán)境中操作。

細(xì)菌凍結(jié)

1．一般規(guī)則情況下，將制備的樣品保持在4°C。

2．將準(zhǔn)備好的細(xì)菌樣品中加入無菌甘油，使得樣品中甘油濃度為15-50％V/V。然后取1mL（或所需體積）分裝于預(yù)先標(biāo)記的TrueCool凍存管中。為了避免降低滴度，減少滴度將凍存管保持在CoolBox里CoolRackCFT30中，維持4°C。  CoolRackCFT30能降低由于單手開關(guān)瓶蓋，造成的污染和泄漏事故。

3．當(dāng)細(xì)菌樣品在CoolRackCFT30維持4°C時(shí)，將 CoolRackCF于干冰上平衡10分鐘。

4．將冷凍樣品轉(zhuǎn)移到一個(gè)儲(chǔ)物盒，并放置在-80°C冰箱長期存放。

細(xì)菌解凍

1．將冷凍樣品從-80℃冰箱中拿出，放置于-12°C 的CoolBoxCFT30冷凍墨盒里，這樣可以保持合適的溫度和安全的傳遞樣品。

2．將凍存管放置在37℃水浴瓶中，慢慢幌動(dòng)小瓶，使其凍融。在整個(gè)液體*解凍前，將凍存管從37°C水浴瓶中拿出放在一個(gè)已經(jīng)在冰上平衡過的CoolRackCFT30上。樣品準(zhǔn)備好可供實(shí)驗(yàn)。