近年來，細(xì)菌感染性疾病嚴(yán)重威脅著人類的健康，抗生素的合理使用是治療和控制此類疾病的有效手段，抗生素體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果的正確與否對抗生素的選擇至關(guān)重要，藥敏試驗(yàn)的結(jié)果受到諸多因素的影響，如培養(yǎng)基、試紙片以及菌液的濃度等。

1、培養(yǎng)基

細(xì)菌藥敏試驗(yàn)所用的培養(yǎng)基種類較多，多數(shù)情況下，采用WHO組織統(tǒng)一要求的M-H培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基中含有的低胸腺嘧啶是與磺胺類藥物競爭的物質(zhì)，因此進(jìn)行的藥敏試驗(yàn)效果較好。此外，還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養(yǎng)基中起到觸媒的作用。但是，有些細(xì)菌對培養(yǎng)基中的成分有特殊的要求，特殊的菌要用特殊的培養(yǎng)基才能進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。例如，流感嗜血桿菌的藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基用HTM瓊脂；淋球菌的藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基用加5％羊血的巧克力M-H瓊脂；肺炎鏈球菌的藥敏實(shí)驗(yàn)用M-H瓊脂加5％的脫纖維羊血培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養(yǎng)基中起到溶酶的作用，其含量的變化，可影響氨基糖苷類和四環(huán)素對銅綠假單胞菌的試驗(yàn)結(jié)果，含量過高，抑菌圈會(huì)變小，含量過低，抑菌圈會(huì)大得不可接受。

細(xì)菌藥敏試驗(yàn)的培養(yǎng)基厚度大約為4mm，若培養(yǎng)基厚度大于4mm，會(huì)使細(xì)菌出現(xiàn)耐藥；若小于4mm，本應(yīng)耐藥的易出現(xiàn)敏感。所以，試驗(yàn)時(shí)一定不要把藥敏紙片放在中央部位，而應(yīng)均勻地排布在平皿周圍的培養(yǎng)基上。制作藥敏試驗(yàn)的培養(yǎng)基用水，主要是Ca2+、Mg2+等礦物質(zhì)離子，也在很大程度上影響著藥敏試驗(yàn)的結(jié)果。

2、試紙片

試紙片材質(zhì)的好壞，對藥物穩(wěn)定性和活性有很大影響。加工藥敏試紙片的試紙一般是使用加厚型的濾紙，雜質(zhì)少，對藥物保存無太大影響。然而，臨床中很多用的是普通紙，被水浸潤后會(huì)呈堿性，并且含有大量無機(jī)離子，因此使用普通紙加工的試紙片藥物有較大的影響。藥敏紙片的PH值一般要求為中性，這樣才適合藥的活度。藥敏紙片的厚度要求大約1mm，這樣才有利于細(xì)菌的生長和藥物的擴(kuò)散速度。藥敏紙片的直徑在6.00～6.35mm之間，紙片的厚度和直徑大小都會(huì)影響藥敏試驗(yàn)的結(jié)果。

含藥紙片的片間差和質(zhì)量好壞是做藥敏試驗(yàn)的關(guān)鍵。一些藥敏紙片買來時(shí)就有抑菌環(huán)偏大或偏小的問題，紙片之間又存在很大的片間差。因此，紙片在用前必須檢驗(yàn)其片間差和準(zhǔn)確度，只有都達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)要求后才能使用。同時(shí)要注意紙片的保存，因?yàn)橛械募埰?，如?霉素類，在保存中因?yàn)槭艹睗癍h(huán)境的影響容易降低其藥物的活性。因此，紙片應(yīng)放低溫下(-10℃)保存，同時(shí)要避免潮濕，以保持抗菌藥物的活性。盛紙片小瓶自低溫處取出應(yīng)在室溫平衡至少10min后再打開，避免冷凝水影響藥效。

3、細(xì)菌

由于各種菌對藥物的敏感性不同，產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小不同，如果菌種不純，試驗(yàn)中所產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小與該菌種在純培養(yǎng)狀態(tài)下產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小存在較大的差異，影響判斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此需要對各種致病菌提純后，分別進(jìn)行不同的藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)時(shí)，需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標(biāo)準(zhǔn)是要求菌液濃度在1．5億/ml左右。若菌液濃度過高，該菌會(huì)對所有藥物產(chǎn)生耐藥；反之，菌液濃度過低，該菌會(huì)對所有藥物均敏感。最/精確的方法是使用分光光度計(jì)測定新鮮培養(yǎng)物菌懸液的吸光度，來確定菌液濃度。國家細(xì)菌耐藥性監(jiān)測網(wǎng)的三級甲等醫(yī)院，其微生物實(shí)驗(yàn)室大多數(shù)用此法來確定藥敏試驗(yàn)的菌液濃度。

藥敏試驗(yàn)中要將菌液均勻地涂在培養(yǎng)基上，使細(xì)菌均勻分布，這樣才能使試驗(yàn)結(jié)果不會(huì)出現(xiàn)較大的偏差。涂菌后15min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后，細(xì)菌要有一段時(shí)間的適應(yīng)過程，但是時(shí)間不能過長，否則會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥。貼藥敏紙片時(shí)，每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口，避免藥敏紙片之間相互混淆，以提高藥敏的準(zhǔn)確性。藥物殺滅細(xì)菌存在一定的量比，藥敏試驗(yàn)培養(yǎng)基上細(xì)菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根據(jù)一種藥物抑菌圈的有無或者大小，只能判斷出該藥對細(xì)菌有沒有效果，但其敏感性的高低需要通過科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)來確定。藥物的敏感程度需要根據(jù)藥敏試驗(yàn)的結(jié)果，并結(jié)合以上因素做綜合分析，才能得出科學(xué)的結(jié)論，而片面地根據(jù)藥敏圈的大小來決定敏感與否，結(jié)果不夠準(zhǔn)確。

綜上所述，造成藥敏試驗(yàn)的結(jié)果可能與實(shí)際效果不符，對藥敏試驗(yàn)要具體情況進(jìn)行相應(yīng)的分析，再根據(jù)藥物的代謝過程和原理綜合論證，藥敏試驗(yàn)的指導(dǎo)意義還是很大的。而且上述因素并不是在我們臨床做藥敏試驗(yàn)過程中都能遇到，對此，我們需要認(rèn)真執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)化的試驗(yàn)方法，認(rèn)真執(zhí)行CLSI質(zhì)控要求，做好室內(nèi)質(zhì)控與室間質(zhì)評，以提高試驗(yàn)的準(zhǔn)確性。嚴(yán)格控制藥敏試驗(yàn)用培養(yǎng)基和藥敏紙片，做到保證質(zhì)量。