一、目的
規(guī)范用于微生物實(shí)驗(yàn)質(zhì)量控制和操作評(píng)估的標(biāo)準(zhǔn)菌株管理與使用程序，盡量減少交叉污染確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠與實(shí)驗(yàn)室安全。
二、范圍
本工作指引適用于微生物實(shí)驗(yàn)室所有標(biāo)準(zhǔn)菌株的管理與使用。
三、參考
四、內(nèi)容
4.1 程序
1.標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)壯
a.將復(fù)壯所用的0.5-1ml液體培養(yǎng)基（如TS或BPW）置于室溫；
b.將標(biāo)準(zhǔn)菌株從冰箱取出置于室溫；
c.無菌操作去除菌株的包裝物；
d.無菌操作敬液體培養(yǎng)基導(dǎo)入菌株容器；或者無菌操作剪開菌株包裝物，將菌株倒入液體培養(yǎng)基；
e.將試管在37℃下放置一段時(shí)間后，使菌種*溶解到培養(yǎng)基中；
f.輕輕搖動(dòng)試管形成懸浮液；
g. 從菌種懸浮液中接種幾環(huán)到培養(yǎng)基平板（如營(yíng)養(yǎng)瓊脂）劃線培養(yǎng)；
h. 將接種過的平板置于合適的溫度和條件下培養(yǎng)復(fù)壯。
2. 從培養(yǎng)過的平板或斜面上挑取幾個(gè)菌落，按照相應(yīng)的LI接種到選擇性培養(yǎng)基上。
3. 將挑選出的菌落按照相應(yīng)的LI進(jìn)行菌種確認(rèn)。進(jìn)行革蘭氏染色或者鏡檢，并純化后按照相應(yīng)的LI進(jìn)行生化試驗(yàn)確認(rèn)。記錄下所有的現(xiàn)象。
4. 在每年復(fù)壯或者買入是都要進(jìn)行菌種確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。
5. 菌種確認(rèn)達(dá)到要求后，使用Microbank Frozen Beads標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株。
a.取一定量的標(biāo)準(zhǔn)菌株培養(yǎng)物（18-24h），無菌操作接種到裝有小珠的小瓶?jī)?nèi)并加入肉湯（BPW）。關(guān)緊小瓶并顛倒4-5次乳化培養(yǎng)物。不要?jiǎng)×覔u晃，避免液體灑出；
b.將多余的液體吸出。關(guān)緊小瓶；
c.在小瓶上貼上標(biāo)簽，標(biāo)明菌種名稱和準(zhǔn)備日期；
d.小瓶在冷凍條件下（大約-20℃）可儲(chǔ)存一年；
e.從Microbank中準(zhǔn)備工作菌株：從小瓶中無菌操作取出一個(gè)小珠，接種到非選擇性培養(yǎng)基平板或斜面，或者放入液體培養(yǎng)基中。小珠從小瓶中取出后決不可以再放回。立即將小瓶放回冷凍；
f. 接種過的平板、斜面或者肉湯放在37℃培養(yǎng)24-48h。一旦發(fā)現(xiàn)平板、斜面或者肉湯有微生物生長(zhǎng)后立即從培養(yǎng)箱取出；
g.在平板、斜面或者肉湯上粘貼標(biāo)簽，注明菌種名稱、準(zhǔn)備日期和有效期。放在冰箱大約4℃儲(chǔ)存。
6. 每次使用一支工作菌株，頻率按照工作需要，通常為一個(gè)星期。一旦發(fā)現(xiàn)菌株有污染現(xiàn)象后立即處理掉并使用新的工作菌株。工作菌株在冰箱內(nèi)保存不超過兩個(gè)星期。
7. 重復(fù)5-6步驟可更新工作菌株。
8. 一旦標(biāo)準(zhǔn)菌株用完或者表現(xiàn)不滿意時(shí)，重復(fù)1-4步驟更新標(biāo)準(zhǔn)菌株。
4.2 儲(chǔ)存
1.采購(gòu)回來的標(biāo)準(zhǔn)菌株需單獨(dú)鎖在-20℃的冰箱內(nèi)。
2.未使用的Microbank小珠放在小瓶?jī)?nèi)儲(chǔ)存在4℃避免陽光直射。一旦發(fā)現(xiàn)Microbank有以下情況時(shí)不得使用：
發(fā)現(xiàn)小瓶有泄露現(xiàn)象；
儲(chǔ)存液發(fā)現(xiàn)渾濁可能表示已經(jīng)被污染；
過了有效期。
3. 所有的采購(gòu)、復(fù)壯、使用和銷毀必須記錄并由主管確認(rèn)。
五、工作流程
1.采購(gòu)回的標(biāo)準(zhǔn)菌株可放在-20℃儲(chǔ)存，直到過期。
2. 使用Microbank Frozen Beads system 制備儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)菌株。
3.在小瓶上注明標(biāo)準(zhǔn)菌株的名稱、準(zhǔn)備日期和有效期。-20℃可保存一年。
4.在平板/斜面/肉湯上注明標(biāo)準(zhǔn)菌株的名稱、準(zhǔn)備日期和有效期。依照需求使用，一旦發(fā)現(xiàn)菌株有污染現(xiàn)象后立即處理掉并使用新的工作菌株。
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