動物細胞培養(yǎng)(animal cell culture)就是從動物機體中取出相關(guān)的組織,將它分散成單個細胞(使用胰蛋/白酶或膠原蛋白酶)然后,放在適宜的培養(yǎng)基中,讓這些細胞生長和增殖。
細胞培養(yǎng)基的種類有哪些?
按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡/鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。
1.DMEM細胞培養(yǎng)基
DMEM(Dulbecco’s modified Minimal Essential Medium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫瘤細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交瘤的骨髓瘤細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)。
2.神經(jīng)元基礎(chǔ)培養(yǎng)基
可為神經(jīng)元生長提供基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)。
3.IPL-41 遠慕生物昆蟲培養(yǎng)基
IPL-41昆蟲培養(yǎng)基(IPL-41 Insect Medium)旨在用于大規(guī)模擴增草地貪夜蛾(Spodoptera frugiperda)細胞系,也常用于通過桿狀病毒表達系統(tǒng)(BEVS)進行蛋白表達。 IPL-41培養(yǎng)基是對原始IPL配方的改良,由美國農(nóng)業(yè)部昆蟲病理實驗室Weiss等人開發(fā),用于大規(guī)模擴增草地貪夜蛾衍生細胞系。Weiss向基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入了胎牛血清和TPB培養(yǎng)基(Tryptose Phosphate Broth),成功地實現(xiàn)了IPL-21 AE (III)細胞系的大規(guī)模連續(xù)培養(yǎng)。
該培養(yǎng)基主要用于培養(yǎng)和維護鱗翅類衍生細胞系和擴增這些細胞系的病毒。IPL-41培養(yǎng)基基礎(chǔ)也以用于無血清夜蛾細胞的桿狀病毒重組蛋白表達。
1.1 平衡/鹽溶液(balanced salt solution,BSS)
BSS主要是由無機鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細胞的漂洗、配制其他試劑等。
目前用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。
1.2 合成細胞培養(yǎng)基
合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計、配制的培養(yǎng)基。最早開發(fā)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(minimal essential medium, MEM),其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎(chǔ)上,DMEM、IMDM、HAM F12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。