傳統(tǒng)的菌種保存方式簡介
斜面保存法:微生物保存最基本的方法,可廣泛用于細菌、真菌等,保存期限非常短,斜面容易干裂。
液體石蠟保存法:可用于保存霉菌、酵母菌、放線菌及需氧菌,方法簡便,可防止斜面干燥和氧氣進入,但一些固氮菌、分枝桿菌、毛霉、厭氧菌等不適宜用此法。
甘油冷凍保存法:用于一般細菌的保存,需使甘油終濃度為20%左右,然后-20℃或-70℃以下保存。融化時需要水浴溶化。
真空冷凍保存法:具有低溫、干燥、無氧的保存條件,適用于98%以上菌種的保存,但操作復雜,一般實驗室難以使用。
液氮保存法:基本所有微生物均可保存,并且保存時間長,但操作較為復雜而且需要設(shè)備,不適用于一般實驗室保存菌種。
沙土保存法
半固體保存法
瓷珠菌種保存法的原理
瓷珠菌種保存管是實驗室保存菌種的容器,管內(nèi)有表面凹孔小瓷珠用于細菌的吸附和保存,放置于-20℃或-80℃下便可創(chuàng)造干燥、低溫、缺營養(yǎng)的環(huán)境,使菌株處于“休眠" 狀態(tài),方可長期保存(視不同菌種與保存溫度,一般可保存3-10 年), 同時菌種保存管的取用和保存較為便利(取用復蘇及保存菌種僅需1分鐘)。
瓷珠菌種保存管的優(yōu)點
用途:菌種保存、復蘇和運輸。
優(yōu)點:操作簡單方便、菌種保存快速、包裝物體積小、菌種保存時間長。
操作簡單方便:挑取細菌新鮮純培養(yǎng)物,接入菌種保存管。
菌種保存快速:混勻后,吸出冷凍保存液。
包裝物體積?。?.8ml冷凍管。
菌種保存時間長:2-8℃可保存6個月;-20℃可保存12個月;-80℃可保存24個月。
瓷珠菌種保存管的使用方法
1.從培養(yǎng)18h以上的平板上刮去新鮮純培養(yǎng)物于菌種保存管中,配成大約3-4麥氏比濁度的菌懸液。
2.擰緊保存管,來回顛倒幾次使細菌乳化,不能旋搖。
3.用無菌移液器將菌種保存管內(nèi)的液體吸取干凈,妥善放置被吸出的液體。
4.擰緊保存管,迅速將其置于-20℃或-70℃冰箱中。
使用時的注意事項
被保存的菌種要求是經(jīng)過純化后培養(yǎng) 18-24h 內(nèi)的新鮮菌種(細菌18-24h,酵母菌需3 天,形成孢子的微生物保存孢子,而放線菌和絲狀真菌需培養(yǎng)7 天后保存),不宜使用老化或未經(jīng)鑒定的菌種。
菌種保存濃度必須要做3-4 麥氏比濁度,如接種濃度過低將會降低復蘇效果。
待保存于菌種保存管中的菌種*乳化均勻吸附在多孔小瓷珠后,要將多余的菌種保存液吸取出來并棄之,否則在復蘇時的凍融過程中會損傷菌株活性。
做厭氧菌保存時,應(yīng)提供厭氧的環(huán)境,如厭氧箱、厭氧袋,菌種保存管中可通入氮氣來驅(qū)除保存菌種時所引入的氧氣。菌種復蘇時,也要創(chuàng)造厭氧的環(huán)境。
菌種復蘇完成后,對使用菌株需要進行再次純化,以保證菌株的單一性。