內(nèi)標(biāo)物和替代物相信大家都用過，你在意過它們的區(qū)別嗎？它們兩者都有校正的作用，使實驗結(jié)果更準(zhǔn)確，那什么時候該用什么呢？遠慕生物為小伙伴們解答！

內(nèi)標(biāo)物和替代物定義：

內(nèi)標(biāo)物--是加到樣品、提取物或標(biāo)準(zhǔn)溶液中已知量的純物質(zhì)，是用來測定同一溶液中其它分析物質(zhì)和替代物的相對響應(yīng)值。內(nèi)標(biāo)物質(zhì)必須是分析的樣品組分中所不含有的，一般是目標(biāo)物的氘代物，用來體現(xiàn)目標(biāo)物的基底效應(yīng)。

替代物--是一種在任何樣品中都不可能被發(fā)現(xiàn)的純物質(zhì)，其在樣品提取和進行其它處理前被加入的等分和量是已知的。它同樣品中其它組分一樣被測定，它的作用是監(jiān)控每個樣品的方法性能。

它是一種與目標(biāo)物性質(zhì)相近的物質(zhì)，一般在前處理之前加，用來表征整個前處理過程的損失或回收率。只是用來監(jiān)測萃取效率，一般認為其回收率在某一范圍（不同標(biāo)準(zhǔn)要求不同）內(nèi)即認為萃取結(jié)果可以定量作為檢查結(jié)果。

異同點

首先都要在標(biāo)準(zhǔn)溶液中加入替代加標(biāo)物和內(nèi)標(biāo)，兩者最主要的區(qū)別在于加入的時間點，萃取前加入，通過最后萃取液的定量，可以確定整個過程的萃取效率及損失，而進樣前加入可以修正進樣誤差，替代加標(biāo)物如在標(biāo)液中選擇為內(nèi)標(biāo)，就可以修正全過程誤差，如果視為外標(biāo)，主要是監(jiān)控回收效率。

內(nèi)標(biāo)法在具體做的時候其實包括兩部分吧，一個是內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制；一個是樣品前處理。在繪制內(nèi)標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線時，縱、橫坐標(biāo)中，一個是濃度，一個比值（待分析物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比，內(nèi)標(biāo)物的濃度是固定的），待分析物的濃度是通過把比值（待分析物與內(nèi)標(biāo)物的比值）代入內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出的，樣品處理雖然會使內(nèi)標(biāo)物有所損失，但是由于待分析物與內(nèi)標(biāo)物濃度是同方向變化的，并不影響定量結(jié)果，這也是內(nèi)標(biāo)法的一個優(yōu)勢所在。

環(huán)境樣品應(yīng)用舉例

1.替代物的作用

替代物監(jiān)控樣品預(yù)處理過程中標(biāo)物的損失或玷污，樣品中不應(yīng)含替代物，替代物也不應(yīng)是目標(biāo)物，但應(yīng)是和目標(biāo)物的物理化學(xué)性質(zhì)相似的化合物，且能夠被定量測定。替代物在樣品預(yù)處理前定量加入樣品中，隨樣品走完預(yù)處理和儀器分析的全過程。

由于替代物不斷存在于樣品中，可以認為替代物的損失或者玷污的程度，即回收率，能夠準(zhǔn)確測量。又由于替代物和目標(biāo)物的物理化學(xué)性質(zhì)相似，在預(yù)處理過程中兩者的損失或玷污的程度是一致的。因此，未知目標(biāo)物在預(yù)處理過程中的回收率，可由已知的替代物的回收率來衡量。這就是替代物在環(huán)境樣品的分析中的作用。

鑒于對替代物的要求，樣品的替代物通常是目標(biāo)物的同位素化合物。例如，測定多環(huán)芳烴時，可選用萘、二氫苊、菲、屈等的氘代化合物。它們的物理化學(xué)性質(zhì)與待測的目標(biāo)物極其相似，萃取過程中的損失或玷污是一致的。經(jīng)過氣相色譜柱的分離后，氘代多環(huán)芳烴可以與待測的多環(huán)芳烴部分分離。接在色譜后的質(zhì)譜檢測器，可把這些質(zhì)量數(shù)不同的氘代物檢出。由于氘代物在天然環(huán)境樣品中含量極微，替代物的回收率可視為目標(biāo)物的回收率。

2.內(nèi)標(biāo)物、替代物與回收率的關(guān)系

目標(biāo)物回收率的計算依靠內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)物與替代物一樣，不應(yīng)在樣品中出現(xiàn)，也不應(yīng)是目標(biāo)物。但對其的物理化學(xué)性質(zhì)的要求不像替代物那么嚴(yán)，只要與目標(biāo)物相近，在檢測器上能被定量檢測就行。例如，在分析多環(huán)芳烴時，內(nèi)標(biāo)物可以是氘代物，也可以是甲基或硝基苯類化合物。內(nèi)標(biāo)物在每個樣品預(yù)處理后，儀器分析前加入樣品中，同處理過的試樣一起走完儀器分析的全過程。內(nèi)標(biāo)物的作用是計算替代物的回收率，美國EPA標(biāo)準(zhǔn)方法中也用來作定量分析的依據(jù)。

回收率過高或過低說明操作過程有誤差，應(yīng)該避免。替代物的回收率在40％至120％間，

分析誤差在要求的范圍內(nèi)。這與傳統(tǒng)的加標(biāo)回收率必須達到近100％的要求有很大差別。

傳統(tǒng)的定量分析一般是利用工作 曲線來進行的， 其間的內(nèi)標(biāo)物可校正儀器分析的誤差，對于預(yù)處理過程中誤差的校正無能為力，因此希望回收率接近100％。而采用替代物后，定量分析依靠替代物進行，利用回收率對數(shù)據(jù)進行校正 。