一、無菌操作要求
 

　　1.接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服、戴工作帽。
 

　　2.進(jìn)行接種食品樣品時(shí)，必須穿專用的工作服、帽及拖鞋，應(yīng)放在無菌室緩沖間，工作前經(jīng)紫外線消毒后使用。
 

　　3.接種食品樣品時(shí)，應(yīng)在進(jìn)無菌室前用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球?qū)⑹植粮蓛簟?br /> 

　　4.進(jìn)行接種所用的吸管，平皿及培養(yǎng)基等必須經(jīng)消毒滅菌，打開包裝未使用完的器皿，不能放置后再使用，金屬用具應(yīng)高壓滅菌或用95%酒精點(diǎn)燃燒灼三次后使用。
 

　　5.從包裝中取出吸管時(shí)，吸管尖部不能觸及外露部位，使用吸管接種于試管或平皿時(shí)，吸管尖不得觸及試管或平皿邊。
 

　　6.接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后及打開試管塞都要通過火焰消毒。
 

　　7.接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前應(yīng)經(jīng)火焰燒灼全部金屬絲，必要時(shí)還要燒到環(huán)和針與桿的連接處，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)應(yīng)在沸水中煮沸5min，再經(jīng)火焰燒灼。
 

　　8.吸管吸取菌液或樣品時(shí)，應(yīng)用相應(yīng)的橡皮頭吸取，不得直接用口吸。
 

　　二、無菌間使用要求
 

　　1、無菌間通向外面的窗戶應(yīng)為雙層玻璃，并要密封，不得隨意打開，并設(shè)有與無菌間大小相應(yīng)的緩沖間及推拉門，另設(shè)有0.5-0.7平方米的小窗，以備進(jìn)入無菌間后傳遞物品。
 

　　2、無菌間內(nèi)應(yīng)保持清潔，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品。
 

　　3、無菌間使用前后應(yīng)將門關(guān)緊，打開紫外燈，如采用室內(nèi)懸吊紫外燈消毒時(shí)，需30W紫外燈，距離在1.0m處，照射時(shí)間不少于30min，使用紫外燈，應(yīng)注意不得直接在紫外線下操作，以免引起損傷，燈管每隔兩周需用酒精棉球輕輕擦拭，除去上面灰塵和油垢，以減少紫外線穿透的影響。
 

　　4、處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無菌間操作，不得隨意出入，如需要傳遞物品，可通過小窗傳遞。
 

　　5、在無菌間內(nèi)如需要安裝空調(diào)時(shí)，則應(yīng)有過濾裝置。
 

　　三、消毒滅菌要求
 

　　微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。
 

　　(一)干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法
 

　　1、滅菌前準(zhǔn)備
 

　　(1)所有需要滅菌的物品首先應(yīng)清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴(yán)密，如用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開。
 

　　(2)裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。
 

　　2、裝放
 

　　(1)干熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁。
 

　　(2)大型高壓蒸氣鍋：：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過擠。
 

　　3、設(shè)備檢查
 

　　(1)檢查門的開關(guān)是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。
 

　　(2)檢查壓力表蒸氣排盡時(shí)是否停留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進(jìn)行：
 

　?、偈痔崾礁邏哄佋谥黧w內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復(fù)使用時(shí)應(yīng)將水量補(bǔ)足，水變混濁需更換).
 

　　②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用)。
 

　　③蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣(水沸騰后排氣10-15min)。
 

　?、荜P(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時(shí)間(按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定)。
 

　?、葸_(dá)到規(guī)定時(shí)間后，對需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時(shí)，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再開蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。
 

　　(3)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進(jìn)行：
 

　　①關(guān)緊鍋門，打開進(jìn)氣閥，將蒸氣引入夾層進(jìn)行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動排出。
 

　?、趭A層達(dá)到預(yù)定溫度后，打開鍋室進(jìn)氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動排出。
 

　?、鄞伿疫_(dá)到規(guī)定的壓力與溫度時(shí)，調(diào)節(jié)進(jìn)氣閥，使保持恒定至
 

　?、茏匀换蛉斯そ禍刂?0℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。
 

　　⑤使用自動程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關(guān)緊門后，應(yīng)根據(jù)物品類別按動相應(yīng)開關(guān)，以便按要求程序自動進(jìn)行滅菌，滅菌時(shí)必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時(shí)間以備查，操作要求應(yīng)嚴(yán)格按照廠家說明書進(jìn)行。
 

　　4、滅菌溫度與時(shí)間
 

　　(1)干熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。
 

　　(2)壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時(shí)間
 

　　(二)間歇滅菌方法
 

　　1、滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。
 

　　(1)將欲滅菌物品置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋，打開排水口，使器內(nèi)余水排盡。
 

　　(2)關(guān)閉排水口，打開進(jìn)氣門，根據(jù)需要消毒10～20min。
 

　　(3)滅菌完畢關(guān)閉進(jìn)氣門，取出物品待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可達(dá)到滅菌目的。
 

　　2、血清凝固器使用方法，培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成份時(shí)，因高熱會破壞其營養(yǎng)成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達(dá)到滅菌目的。
 

　　(1)在使用該法滅菌的血清等分裝時(shí)，需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后使用。
 

　　(2)將培養(yǎng)基按要求使成斜面或高層，加足水后，接上電源，升溫75～90℃1h滅菌，放37℃溫箱過夜，再如此滅菌三次。
 

　　3、煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%甲醛，80℃煮60min均可達(dá)到滅菌目的，但選用煮沸消毒的增消劑時(shí)，應(yīng)注意對物品的腐蝕性。
 

　　4、滅菌處理：滅菌后物品，按正常情況已屬無菌，從滅菌器中取出應(yīng)仔細(xì)檢查放置，以免再度污染。
 

　　(1)物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無菌物品使用。
 

　　(2)取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無菌物品使用。
 

　　(3)培養(yǎng)基或試劑等，應(yīng)檢查是否符合達(dá)到滅菌后的色澤或狀態(tài)，未達(dá)到者應(yīng)廢棄。
 

　　(4)啟閉式容器，在取出時(shí)應(yīng)將篩孔關(guān)閉。
 

　　(5)取出的物品掉落在地或誤放不潔這處，或沾有水液，均視為受到污染，不可作為無菌物品使用。
 

　　(6)取出的合格滅菌物品，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴(yán)禁與未滅菌物品混放。
 

　　(7)凡屬合格物品，應(yīng)標(biāo)有滅菌日期及有效期限。
 

　　(8)每批滅菌處理完成后，記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時(shí)間、操作者。
 

　　四、有毒有菌污物處理要求
 

　　微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室。
 

　　1、經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴(yán)密的容器或鐵絲筐內(nèi)，并集中存放在zhi定地點(diǎn)，待統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌。
 

　　2、經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)121℃30min高壓滅菌。