提純蛋白質(zhì)后,需要測(cè)定其最小抑菌濃度(MIC),有文獻(xiàn)提到根據(jù)MIC測(cè)得的結(jié)果計(jì)算抑菌率:
抑菌率(%)= (陽性對(duì)照OD值—試驗(yàn)OD值) / (陽性對(duì)照OD值—陰性對(duì)照OD值 )X100
樣品的MIC與同-性質(zhì)藥物和一些常用藥物的MIC進(jìn)行比較才有意義,不能單純通過自己樣品的結(jié)果就判斷出高低,并且不能只用一種細(xì)菌。要考慮用不同種類的細(xì)菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn),還要做質(zhì)控。根據(jù)抑菌率大小可以判斷是否具有抑菌能力。
可參考以下藥敏介紹:
諸多藥敏試驗(yàn)方法中,肉湯稀釋法是標(biāo)準(zhǔn)方法,瓊脂稀釋法也可認(rèn)為屬于標(biāo)準(zhǔn)方法。其他任何方法必須與標(biāo)準(zhǔn)方法比較,才能確定可靠性。其他方法之間相互比較沒有太大價(jià)值。比較須平行測(cè)定耐藥菌株和敏感菌株。耐藥菌株,被評(píng)價(jià)方法與標(biāo)準(zhǔn)方法的誤差稱極重要誤差,不得大于3%;敏感菌株,被評(píng)價(jià)方法的誤差稱重要誤差,不大于7%。
不同的藥敏試驗(yàn)方法,針對(duì)不同藥物,可靠性不一樣。如測(cè)MRSA須高鹽條件,有的試劑盒中不加鹽,結(jié)果不準(zhǔn)確,但這不影響腸球菌的測(cè)定結(jié)果。所以,評(píng)價(jià)一種方法,應(yīng)該是有針對(duì)性地驗(yàn)證一種細(xì)菌對(duì)一種藥物測(cè)定結(jié)果的可靠性。
質(zhì)量控制及其校準(zhǔn)作用
1、紙片法藥敏試驗(yàn)
用敏感菌株做質(zhì)量控制。此外,ATCC25923,ATCC25922,ATCC27853三個(gè)菌株還具備校準(zhǔn)作用,此點(diǎn)往往被忽視。在NCCLS有關(guān)文件中,質(zhì)量控制一節(jié)的第1部分就是講方法的校準(zhǔn)。由于培養(yǎng)基和操作的原因,國內(nèi)大部分實(shí)驗(yàn)室的藥敏試驗(yàn)沒有經(jīng)過校準(zhǔn),試驗(yàn)的準(zhǔn)確度差異很大。校準(zhǔn)過程中,須注意用適合的參考菌株校準(zhǔn)相應(yīng)菌類的藥敏試驗(yàn)。如葡萄球菌藥敏試驗(yàn)用ATCC25923校準(zhǔn);腸桿菌藥敏試驗(yàn)用ATCC25922校準(zhǔn)。
2、篩選法藥敏試驗(yàn)
必須用耐藥菌株做質(zhì)量控制,*是低水平耐藥菌株。MRS篩選試驗(yàn)以ATCC43300控制。萬古霉素篩選試驗(yàn),以ATCC51299控制。
3、稀釋法藥敏試驗(yàn)
對(duì)質(zhì)量控制要求較高,特別是微量稀釋法,必須做質(zhì)量控制,否則會(huì)出現(xiàn)較大誤差。具體方法須依照NCCLS文件的有關(guān)部分。
與不同的菌種和不同的藥物,breakpoint 是不一樣, 對(duì)于抗菌實(shí)驗(yàn)和結(jié)果解釋,不同的國家有不同的標(biāo)準(zhǔn),目前國-際上蕞常用的是美國CLSI的標(biāo)準(zhǔn),差不多每年都會(huì)有更新。其次英國的BSAC標(biāo)準(zhǔn)也有人用,尤其是有些新藥在CLSI上沒有的,可以參考BSAC, 相對(duì)于CLSI, BSAC breakpoint 更低一些。