做細(xì)胞實(shí)驗的親們，經(jīng)常需要對細(xì)胞的活性進(jìn)行驗證，如何知道自己研究的細(xì)胞是否還活著，活性怎么樣? PCR、抗體IHC染色等細(xì)胞分析方法進(jìn)行活性檢測，由于只能反映某個時間點(diǎn)的細(xì)胞行為而具有局限性。當(dāng)傳統(tǒng)細(xì)胞分析方法無法獲得預(yù)期結(jié)果時，使用實(shí)時細(xì)胞分析方法通常會得到很多新的生物學(xué)發(fā)現(xiàn)，因此活細(xì)胞分析技術(shù)在科研過程中發(fā)揮著越來越關(guān)鍵的作用。今天小編來為您介紹一下我們常用的分析細(xì)胞活性的方法。
實(shí)驗室細(xì)胞活性檢測的常用方法有（包括活性檢測和增殖檢測）：
化學(xué)發(fā)光法細(xì)胞活性檢測
熒光染料細(xì)胞活性檢測
細(xì)胞代謝檢測
細(xì)胞計數(shù)檢測（臺盼藍(lán)）
DNA合成增殖
化學(xué)發(fā)光法細(xì)胞活性檢：
腺苷三磷酸（ATP adenosine triphosphate）是由腺嘌呤、核糖和3個磷酸基團(tuán)連接而成，水解時釋放出能量較多，是生物體內(nèi)直接的能量來源。ATP發(fā)光法，是通過檢測細(xì)胞內(nèi)ATP含量來分析細(xì)胞活性及增殖的。常見的ATP發(fā)光法是利用外源螢火蟲熒光素/熒光素酶與細(xì)胞內(nèi)的ATP發(fā)生氧化反應(yīng)而產(chǎn)生光子，通過監(jiān)測光度來檢測ATP含量，從而分析細(xì)胞活性與增殖。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏、快速、便捷、穩(wěn)定，同時可以把ATP數(shù)量化，用相對光強(qiáng)度（RLU）來進(jìn)行定量。
熒光染料細(xì)胞活性檢測
在所有現(xiàn)有的熒光染料中，熒光素二乙酸酯（FDA）及其衍生物（如CFSE）是非熒光分子，其擴(kuò)散到細(xì)胞中并被細(xì)胞內(nèi)非特異性酯酶水解以產(chǎn)生熒光。熒光產(chǎn)物僅在具有完整細(xì)胞膜和活性酯酶活性的細(xì)胞中產(chǎn)生和積累,熒光產(chǎn)物會跟隨細(xì)胞分裂，被平均分配到子細(xì)胞中。進(jìn)一步可用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞分裂增殖的情況，還可以通過細(xì)胞完整性對活死細(xì)胞分別進(jìn)行標(biāo)記。
優(yōu)點(diǎn)：活體標(biāo)記、簡單、穩(wěn)定、熒光時間長
細(xì)胞代謝檢測
CCK-8檢測是一種基于 SST-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測。其主要成分為水溶性四唑鹽 SST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，SST-8 是一種類似于 MTT 的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜。SST-8 被細(xì)胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的甲臜能夠直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。
優(yōu)點(diǎn)：
1.CCK-8法產(chǎn)生的甲臜是水溶性的，不僅省去了溶解步驟，更因此而減少了該操作步驟帶來的誤差。.MTT實(shí)驗生成的甲臜不是水溶性的，需要使用 DMSO 等有機(jī)溶劑溶解。
2.線性范圍更寬，靈敏度更高。
3.對細(xì)胞無毒性，可以多次測定，選取jia測定時間。
4.所用試劑在培養(yǎng)基中比 MTT 更加穩(wěn)定，實(shí)驗結(jié)果重復(fù)性好。
5.MTT 具有毒性，同時其生成的甲臜需要有機(jī)溶劑溶解，會對操作人員身體造成危害。
細(xì)胞計數(shù)檢測
臺盼藍(lán)染料是一種重要的染色劑，可以將死組織或死細(xì)胞染成藍(lán)色而具有完整細(xì)胞膜的活細(xì)胞或組織卻不著色。 由于細(xì)胞在通過膜的化合物中具有很高的選擇性，因此在活細(xì)胞中，臺盼藍(lán)不被吸收; 然而，它可以穿過死細(xì)胞中的膜。 因此，死細(xì)胞在顯微鏡下顯示為*的藍(lán)色。
優(yōu)點(diǎn)：用于辨別區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞，以及檢測細(xì)胞膜的完整性。
DNA合成增殖
BrdU是胸腺嘧啶的衍生物，常用于標(biāo)記活細(xì)胞中新合成的DNA,可代替胸腺嘧啶選擇性整合到復(fù)制細(xì)胞中新合成的DNA中（細(xì)胞周期S期）這種摻入可以穩(wěn)定存在，隨著DNA復(fù)制進(jìn)入子細(xì)胞中，BrdU的特異性抗原可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細(xì)胞的增殖能力。
