組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)研究的對(duì)象不一般，它是具有完整生命力的生物單位，因此與其他一般實(shí)驗(yàn)工作不同，要求保持無(wú)菌操作，避免微生物及其他有害因素的影響。本文將主要針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，講解建設(shè)使用注意事項(xiàng)。
一、基礎(chǔ)建設(shè)方案之墻頂?shù)?/span>
（1）墻體
廢物暫存間、強(qiáng)電間、水處理間可采用乳膠漆墻面，其他實(shí)驗(yàn)室區(qū)域采用玻鎂板墻體。玻鎂板是氧化鎂、氯化鎂、和水三元體系，具有防火防水、無(wú)味無(wú)du、高強(qiáng)質(zhì)輕、施工方便、使用壽命長(zhǎng)等特點(diǎn)。
（2）天花
防火等級(jí)達(dá)到A級(jí)：天花選用彩鋼板。實(shí)用美觀，且易清潔消毒、光滑防水。
防火等級(jí)達(dá)到B1級(jí)：天花選用鋁扣板。可大幅度降低通風(fēng)和機(jī)電施工及維修的難度和強(qiáng)度，也利于日后的正常維護(hù)和檢修。
（3）地面
地面材料的選擇通常要求抗靜電、抗菌耐磨、耐腐蝕、防火、防塵、降噪音等，色澤選擇和墻體統(tǒng)一或相似的2.2mm厚進(jìn)口品牌PVC卷材，防火等級(jí)為B級(jí)以上。
二、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)分區(qū)
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能進(jìn)行六方面的工作：
無(wú)菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲(chǔ)藏。
無(wú)菌操作區(qū)——
理想的無(wú)菌操作室應(yīng)劃為三部分：
●geng衣室：供geng換衣服、鞋子及穿戴帽子和kou罩。
●緩沖間：位于geng衣間與操作間之間。
目的是為了保證操作間的無(wú)菌環(huán)境，同時(shí)可放置恒溫培養(yǎng)箱及某些必需的小型儀器。
●無(wú)菌操作間：于無(wú)菌操作、細(xì)胞培養(yǎng)。
大小要適當(dāng)，且其頂部不宜過(guò)高（不超過(guò)2.5m），以保證紫外線的有效滅菌效果；
墻壁光滑*以便清潔和消毒；
工作臺(tái)安置不應(yīng)靠墻壁，臺(tái)面要光滑壓塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖組織及酚紅顯示pH的觀察。
孵育區(qū)——本區(qū)對(duì)無(wú)菌的要求雖不比無(wú)菌區(qū)嚴(yán)格，但仍需清潔無(wú)塵，因此也應(yīng)設(shè)置在干擾少而非來(lái)往穿行的區(qū)域。孵育可在孵箱或可控制溫度的溫室中進(jìn)行，后者費(fèi)用高，一般實(shí)驗(yàn)室多采用孵箱進(jìn)行工作。
儲(chǔ)藏區(qū)——主要存放各類(lèi)冰箱、干燥箱、液氮罐、無(wú)菌培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等，環(huán)境需要清潔無(wú)塵。
制備區(qū)——主要進(jìn)行培養(yǎng)液及有關(guān)培養(yǎng)用的液體等的制備。
清洗和消毒滅菌區(qū)——清潔和消毒滅菌區(qū)應(yīng)與其他區(qū)域分開(kāi)，主要進(jìn)行所有細(xì)胞培養(yǎng)器皿的清洗、準(zhǔn)備、消毒及三蒸水制備等工作。
三、保衛(wèi)細(xì)胞，橫掃污染源的7大戰(zhàn)場(chǎng)
2008年8月，《The Scientist》期刊發(fā)表了一篇題為 A case of mistaken identity 的文章，文中指出現(xiàn)已發(fā)表的 650 多項(xiàng)研究中所用的ru腺癌細(xì)胞可能并不是真正的ru腺癌細(xì)胞。
對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)，杜絕一切可能的污染源至關(guān)重要。
①細(xì)胞房入口：和緩沖間相連，緩沖間內(nèi)備消毒服裝和鞋，kou罩等，入內(nèi)換上。進(jìn)入后經(jīng)過(guò)洗手-消毒—戴手套-再消毒。
②水浴鍋：對(duì)其進(jìn)行定期消毒，也可以向水浴中加入適量的殺菌劑來(lái)抑制各種細(xì)菌、真菌的滋長(zhǎng)。zuihao用恒溫孵育器代替水浴鍋，確保溫控精que性和均一性的同時(shí)也減少了污染的概率。
③顯微鏡：敞口放置培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶。防止造成溶液飛濺，或觀察時(shí)污染物鏡，并進(jìn)一步造成交叉污染。
④CO2 培養(yǎng)箱：對(duì)于日常使用來(lái)說(shuō)，至少每月清潔培養(yǎng)箱一次。盡量減少門(mén)打開(kāi)次數(shù)，避免對(duì)溫度、培養(yǎng)基中 pH 值調(diào)節(jié)的影響。
另外要特別注意，CO2培養(yǎng)箱不能直接放在地板上。
⑤生物安全柜：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，必須對(duì)超凈臺(tái)進(jìn)行全面消毒，正確的做法是對(duì)整個(gè)機(jī)柜表面進(jìn)行擦拭。還有一件事*，那就是事先打開(kāi)安全柜通風(fēng)系統(tǒng)，流通空氣，直到原有的內(nèi)部濁氣都被排出。
⑥離心機(jī)：和顯微鏡一樣，離心機(jī)也是交叉污染的重災(zāi)qu。平日里應(yīng)保持離心機(jī)蓋關(guān)閉，拒污染于千里之外。離心機(jī)內(nèi)部的小縫隙是藏污納垢之處，定期清潔轉(zhuǎn)子和腔室至關(guān)重要。
⑦窗戶(hù) ：細(xì)胞房通常沒(méi)有窗戶(hù)，如果有窗，那么無(wú)論什么時(shí)段，窗戶(hù)都不允許打開(kāi)。同時(shí)拉上窗簾，做好請(qǐng)勿開(kāi)啟的警示標(biāo)記。
四、珍愛(ài)生命，看好那個(gè)“液氮罐”
1992年，一艘日本放在凍存船的液氮罐外膽破裂，導(dǎo)致原有的罐內(nèi)9.3bar的正常壓力，瞬間變成了68.7bar。接著整條船炸了，方圓400米內(nèi)的車(chē)和房子全部損毀，船被炸出了350米。
另外，液氮罐的作死方式不光是爆炸，還能很溫和。
那是爆炸的8年后，在愛(ài)丁堡的MRC西城醫(yī)院凍存細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)人員詹姆斯，由于液氮蓋子沒(méi)關(guān)導(dǎo)致的泄露，zui終窒息死亡。
這并不是個(gè)例，類(lèi)似的事故時(shí)有發(fā)生。因此工作人員在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)操作的時(shí)候，一定要實(shí)時(shí)控制好液氮柜。這既是對(duì)自己生命的負(fù)責(zé)，也是對(duì)他人生命的尊重。
五、找專(zhuān)業(yè)人，做專(zhuān)業(yè)事
建設(shè)一座功能完善的實(shí)驗(yàn)室，要由專(zhuān)業(yè)的人員進(jìn)行專(zhuān)業(yè)設(shè)計(jì)，要全面綜合考慮，遵循以人為本的原則，建成正規(guī)化、標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)室達(dá)到zuijia的使用效果。
