一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)或顆粒生成。首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會(huì)大量繁殖,培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁.污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長(zhǎng)狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):
(1)細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老,破碎的細(xì)胞殘??;
(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長(zhǎng);
(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格.可應(yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn);
細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)或顆粒解決辦法:
1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢(shì),那么就有可能是污染了,需要處理;
2、如果小黑點(diǎn)沒有增殖趨勢(shì),且不影響細(xì)胞生長(zhǎng),也不影響實(shí)驗(yàn)的話,則可能是以下幾種情況。
a、是「黑膠蟲」,黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭(zhēng)議。有人認(rèn)為是從血清中來(lái)的一種原蟲,也有人認(rèn)為是細(xì)菌,或是真菌,也有人認(rèn)為是血清中的蛋白的結(jié)晶?!负谀z蟲」可寄生于動(dòng)物細(xì)胞,也可以生存于培養(yǎng)基中,依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生,并隨細(xì)胞傳代而傳代?!负谀z蟲」與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng),開始時(shí)對(duì)細(xì)胞并沒有什么影響,但當(dāng)黑膠蟲的數(shù)量多到一定程度的時(shí)候, 細(xì)胞生長(zhǎng)就會(huì)受到影響直至死亡,嚴(yán)重影響了科研活動(dòng)的開展和進(jìn)行。以前(這個(gè)至少是 10 年以前),很多實(shí)驗(yàn)室在養(yǎng)細(xì)胞時(shí)用國(guó)產(chǎn)血清,那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過(guò)關(guān),有所謂的「黑膠蟲」,但是也沒有明確的鑒定。但是現(xiàn)在的血清,即使國(guó)產(chǎn)的,如四季青等稍大點(diǎn)的廠家,產(chǎn)品里這種現(xiàn)象就少見了。
b、是細(xì)胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗運(yùn)動(dòng)。
c、是核糖體,也可能是雜質(zhì)。
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