在這溫暖的時(shí)光里,遠(yuǎn)慕與您一同暢談血清實(shí)驗(yàn)的基本原則。
1、解凍血清時(shí),請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。并隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
2、 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會(huì)變得混濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
3、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
4、 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。
5、 在進(jìn)行傳代培養(yǎng)時(shí),我們強(qiáng)烈推薦進(jìn)行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個(gè)簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進(jìn)行傳代,不進(jìn)行活性檢測,您可能接種比您認(rèn)為的低的多的濃度的細(xì)胞,這常??赡軐?dǎo)致生長緩慢或培養(yǎng)物根本不生長。
6、 貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液只能使用一周。胰蛋白酶在4℃就可能開始降解,如果在室溫下放置超過30分鐘,就會(huì)變得不穩(wěn)定。
血清的熱滅活在免疫分析時(shí)可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往*的操作步驟,并沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反,對大部分細(xì)胞而言,GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因?yàn)榧訜峥赡苁寡逯械某恋碓黾?,使您誤以為污染。