上海遠慕【進口 國產(chǎn)】標準品對照品廠家詳細講述硬組織線粒體分離試劑盒的信息簡介及其他咨訊，本司所供應(yīng)的試劑盒品種齊全，價格實惠，本品屬細胞組分離類，有效期一般為12個月，同期分離試劑盒還包含有細胞線粒體分離試劑盒，組織線粒體分離試劑盒，更多試劑盒品種請來電!
【信息說明】
產(chǎn)品名稱：硬組織線粒體分離試劑盒
供應(yīng)商：遠慕標準品對照品廠家
規(guī)格：50T
分類：細胞組分分離
儲存條件：-20℃,12個月
用途：適用于快速從動物硬組織(心肌、骨骼肌)或其他難以分離線粒體的組織中提取線粒體。
注意事項：采用梯度離心法分離線粒體外膜和內(nèi)膜以及基質(zhì)膜,大部分獲得的線粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜
【簡介說明】
線粒體是細胞呼吸的主要場所，細胞活動所需的能量主要由在線粒體內(nèi)進行的氧化所產(chǎn)生的能量來供應(yīng)。
硬組織線粒體分離試劑盒(Hard Tissue Mitochondria Isolation Kit)是快速便捷分離動物硬組織(如骨骼肌)中的線粒體，分離線粒體的同時可以獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，適用于從動物硬組織(心肌、骨骼肌)或其他難以分離線粒體的組織中提取線粒體。
【操作步驟】
1、清洗：迅速稱重，用預冷的清洗，棄Wash buffer，冰上剪成大小的組織碎片。
2、裂解：加入Mitochondria Lysis buffer，置于冰浴。
3、勻漿Ⅰ：轉(zhuǎn)移至預冷的Dounce勻漿器中，勻漿，或采用電動勻漿器，700rpm，8～10次。不同組織或不同勻漿器所需的勻漿次數(shù)有所不同，需自行優(yōu)化。
4、勻漿Ⅱ：4℃攪拌孵育。用等體積的Mitochondria Stock buffer稀釋至勻漿液，再次重復步驟3。
5、離心：用尼龍網(wǎng)或細胞篩過濾勻漿液，4℃，離心，以去除細胞核、未破碎的細胞和大的膜碎片。
6、上清液轉(zhuǎn)移至一干凈離心管，4℃離心。注：如需獲得純度更高的線粒體，可以將此步驟的離心速度改為6000g離心10min，其缺點是相同數(shù)量細胞的線粒體抽提得率會下降。
7、棄上清，沉淀為線粒體，如果希望獲得去除線粒體的細胞漿蛋白，應(yīng)在本步驟中收集上清，并且在收集上清時注意勿觸及沉淀。
8、保存：棄上清，用適當緩沖液懸浮沉淀。如果用于線粒體酶活性或功能的分析，線粒體沉淀應(yīng)重懸于Mitochondria Stock buffer;如果用于線粒體蛋白的分析，獲得的細胞漿蛋白應(yīng)保存于1×Protein Stock buffer，即按細胞漿蛋白：Protein Stock buffer (5×)=1:4比例混合;如果用于雙向電泳，應(yīng)使用恰當?shù)谋４嬉骸?/span>
【注意事項】
1、試劑 (如PMSF)對于不同實驗不必全部使用，在實驗條件成熟后可以不必使用。
2、分離線粒體的所有步驟均需在冰上或4℃進行，所用溶液需冰浴或4℃預冷，全部操作時間盡量控制在1h以內(nèi)。
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