【DEAE 纖維素 DE-52】簡(jiǎn)介說明_處理方法_操作步驟_注意事項(xiàng)由上海遠(yuǎn)慕生物提供，本司現(xiàn)貨銷售ELISA試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品，動(dòng)物血清，瓊脂糖凝膠，葡聚糖凝膠，培養(yǎng)基，抗體，抗原，酶類，生化試劑，化學(xué)試劑，多肽，生物分子，微生物，實(shí)驗(yàn)耗材，染色液，溶液，緩沖液，維生素，蛋白質(zhì)，其他試劑等，歡迎選購(gòu)!
【DEAE 纖維素 DE-52】使用說明
DEAE 纖維素 DE-52簡(jiǎn)介說明
為中等堿性陰離子交換劑，柱層析用于吸附劑，用以分離提純多糖、肽、核苷酸、酶、血清組分和病毒等各種生物高分子。
DEAE-纖維素，它采用平均粒徑為50µm的顆粒型親水高分子聚合物，表面又用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高載量，同時(shí)又具有更好的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時(shí)間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒，質(zhì)粒等超大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變。本產(chǎn)品物理和化學(xué)穩(wěn)定性好，使用壽命長(zhǎng)，操作方便。
DEAE 纖維素 DE-52處理方法
關(guān)于DEAE52纖維素的處理只有簡(jiǎn)單的幾步，如下:
1、先將干粉的纖維素浸泡在蒸餾水中，一段時(shí)間大約3小時(shí)左右，我偏愛這個(gè)時(shí)間，去除雜質(zhì)，抽干一下。
2、再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小時(shí)，用去離子水洗凈至PH中性，并抽干。
3、將抽干的纖維素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小時(shí)，用去離子水洗至中性，抽干。即可用了。
對(duì)于用過的纖維素，可以重復(fù)利用多次，但需要經(jīng)過再生處理后才可以使用。再生處理可先用高濃度NaCl (1-2 mol/L)過柱沖洗柱床，以除去DEAE-52陰離子交換纖維所吸附的成份。然后，再用0.5 mol/L的HCl和NaOH處理，處理方法與預(yù)處理*相同。
DEAE 纖維素 DE-52操作步驟
1、DE52纖維素的處理：DE52經(jīng)酸、堿處理，0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡。
2、裝柱：將層析柱固定于滴定架上，柱底墊一圓形尼龍紗，出口接一細(xì)塑料管并關(guān)閉出水。將浸泡于0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl中的DE52沿玻璃棒倒入柱中，待DE52自然沉降3～5cm高時(shí)，吸除0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl，或松開出水口螺旋夾，控制流速1～2ml/min，同時(shí)連續(xù)加入DE52至所需高度。待DE52*沉降后，柱面放一圓形濾紙片。
3、平衡：松開出水口螺旋夾，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl平衡，控制流速為15滴/min，待流出液與洗脫液之pH值達(dá)到一致時(shí)，停止平衡。
4、待提取樣品的準(zhǔn)備：將蛋白裝入透析袋里，置4℃冰箱，對(duì)0.01mol/L pH8.6 Tris-Cl透析過夜。
5、加樣、洗脫與收集：用吸管吸去柱面液體，以毛細(xì)吸管沿柱壁加入樣品，樣品體積相當(dāng)于柱床體積的1%～2%，蛋白濃度為50～70mg。啟開出水口螺旋夾使樣品緩慢進(jìn)入柱床內(nèi)，并用少量洗脫液清洗柱壁;待液體進(jìn)入柱床后，以0.01mol/L，pH8.6 Tris-Cl洗脫，控制流速為14～16滴/min。分部收集器收集，紫外監(jiān)測(cè)，或人工收集，以紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定每管280nm OD值，描繪洗脫液峰。
6、濃縮：將洗脫液的280nm OD上峰段與下峰段各管分別合并，裝入透析袋，以PEG濃縮至所需體積。
DEAE 纖維素 DE-52注意事項(xiàng)
1、色譜柱裝填
a、所需要用到的材料的溫度要與色譜操作的溫度一樣，液體做脫氣處理。填料可直接稱量需要的量用緩沖液溶漲一小時(shí)裝柱即可.
b、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空氣，關(guān)閉柱子出口，在柱內(nèi)保留少量的20%乙醇。20%乙醇容易產(chǎn)生氣泡，可以在里面加1%吐溫避免氣泡產(chǎn)生。也可以換成純水裝柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也換成純水，具體的方法取需要體積的填料在抽濾漏斗上進(jìn)行，也可以小心傾去填料上的20%乙醇，再換成5倍體積的純水，反復(fù)沉淀去上清，5次左右就可以用于裝柱子。
c、此填料顆粒比較細(xì)，所以一定要注意柱子要選擇合適的篩網(wǎng)，不能漏，也可以取點(diǎn)填料加到篩網(wǎng)上試試，如果沒有問題再將填料連續(xù)倒入柱子時(shí)，要用玻璃棒的緊靠柱子內(nèi)壁引流，以減少氣泡的產(chǎn)生，讓填料先自然沉降到填料體積不再變化，而填料和上面的液體很好分層，上層溶液*澄清，就可以開泵用適當(dāng)?shù)牧魉賶褐?，填料體積不再變化后，再把轉(zhuǎn)換頭緊頂在填料上就可以平衡柱子使用。使用的流速要小于裝柱子的流速。
d、在裝柱子前，填料從冰箱中取出至少要室溫放置2-3個(gè)小時(shí)，這樣避免裝柱子時(shí)由于溫度變化而使柱子中產(chǎn)生氣泡。
2、 蛋白的結(jié)合
樣品的鹽濃度和pH要盡量和平衡柱子的緩沖液一致，鹽濃度過高或者pH帶低也許掛不上，所以要根據(jù)自己的樣品做適當(dāng)調(diào)整。
3、 蛋白的洗脫
這個(gè)填料如果采用線性梯度洗脫，柱子的直徑和高度比是大于10，數(shù)值越大越有利于分離，而且樣品別上太多，可以按約10mg/ml上樣，如果采用階段洗脫的方法，裝短粗柱子就可以，上樣量也沒有限制。階段洗脫容易放大，重復(fù)性好，如果洗脫條件好*可以得到和線性梯度一樣或者更好。采用什么方法*根據(jù)自己需要。
4、再生清洗
a、每次用完用0.5MNaOH含2M NaCl洗5個(gè)床體積，再用水洗5個(gè)柱床體積，然后用20%乙醇保存，使用3-5次后在水洗之后再用70%的乙醇或30%異丙醇都含1%吐溫洗5個(gè)柱床體積，zui后20%的乙醇流洗5個(gè)柱床體積。
b、有機(jī)溶劑和水混合很容易產(chǎn)生氣泡，為了避免這樣情況，可以把配好的有機(jī)溶劑在室溫放置過夜，再使用，這樣可以避免氣泡進(jìn)柱子而導(dǎo)致柱子不能正常使用。
5、保存
在20%乙醇中，4℃下長(zhǎng)期保存。
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