【明膠-瓊脂糖凝膠4FF】參數(shù)及使用方法，簡介由上海遠(yuǎn)慕生物提供講述，本司的瓊脂糖凝膠有：谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠 4FF，苯甲脒-瓊脂糖凝膠 6B，藍(lán)色-瓊脂糖凝膠 6FF，肝素-瓊脂糖凝膠 6FF，紅色-瓊脂糖凝膠 6FF， 辛基-瓊脂糖凝膠 H.P.，辛基-瓊脂糖凝膠 4FF，丁基-瓊脂糖凝膠 4FF，更多系列請(qǐng)!
【明膠-瓊脂糖凝膠4FF參數(shù)說明】
中文名：明膠-瓊脂糖凝膠4FF
英文名：Gelatin Sepharose 4FF
供應(yīng)商：上海遠(yuǎn)慕
規(guī)格：25ml、100ml
基質(zhì)：4%交聯(lián)瓊脂糖
形狀：球形
粒徑：45~165 μm
耐壓：0.3MPa
耐熱：120℃,pH7,水中20min
zui高流速：250cm/h
排阻極限：60000~20×106 (球蛋白)
【明膠-瓊脂糖凝膠4FF】參數(shù)_使用方法
【明膠-瓊脂糖凝膠4FF簡介】
明膠-瓊脂糖凝膠4FF是采用溴化氰法將明膠耦合到瓊脂糖凝膠4FF基質(zhì)上的一種親和層析填料；明膠是一種高分子糖蛋白，在多種細(xì)胞的表面和許多細(xì)胞外液(包括血漿)中都發(fā)現(xiàn)了明膠的存在，它可以特異性的結(jié)合纖維連接蛋白；明膠瓊脂糖凝膠4FF是專為純化或除去纖維連接蛋白的一種親和層析填料。
【明膠-瓊脂糖凝膠4FF使用方法】
1、準(zhǔn)備凝膠
a、讓凝膠和所有的試劑達(dá)到工作時(shí)的溫度。
b、配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
c、明膠瓊脂糖凝膠4FF是保存在20%的乙醇溶液中，取適量凝膠，清洗掉20%的乙醇，抽干。用緩沖液(按凝膠：緩沖液=3：1的比例)配成勻漿。
2、裝柱
a、將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜)，務(wù)必使底端無氣泡。
b、用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
c、打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
3、平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。
4、上樣
a、樣品用平衡液配制，常用磷酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
b、一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
5、洗脫
明膠-瓊脂糖凝膠4FF可以采用不同的方式洗脫纖維連接蛋白：
a、使用含有溴鹽的緩沖液，例如溴化鈉或溴化鉀，并在低于平衡緩沖液pH值的條件下洗脫。一種推薦的洗脫緩沖液是：0.05M的醋酸鈉，pH值5.0，含1.0M的溴化鈉或溴化鉀。
b、可以在平衡緩沖液中加入8M的脲，來洗脫吸附在凝膠上的纖維連接蛋白。
c、纖維連接蛋白還可以通過在平衡緩沖液中添加精氨酸來進(jìn)行洗脫。
6、再生
根據(jù)樣品的性質(zhì)，明膠瓊脂糖凝膠4FF可以再生，以達(dá)到重復(fù)使用的目的?？梢圆捎?-3柱體積的高pH值(0.1M的Tris-HCl，0.5MNaCl，pH值8.5)的緩沖液和低pH值(0.1MNaAC，0.5MNaCl，pH值4.5)的緩沖液交替清洗凝膠。一個(gè)周期重復(fù)3次，然后用3-5倍柱體積的平衡緩沖液平衡，即可進(jìn)行下次試驗(yàn)。如果在純化過程中使用了洗滌劑或變性劑 (如8M尿素)，那么這些洗滌劑也可以用于洗脫緩沖液中。
7、清洗
在一些應(yīng)用中，像變性的蛋白質(zhì)或脂類這樣的樣品，在再生過程沒有被洗脫下來，可以通過加入一些洗滌劑，例如：0.1%的TritonX-100，在37°C的條件下洗一會(huì)。立即用至少5倍柱體積的結(jié)合緩沖重新平衡。
8、儲(chǔ)存
明膠-瓊脂糖凝膠4FF應(yīng)儲(chǔ)存在4-8℃，20%的乙醇溶液中。
特別注意：上樣之前，樣品必須去除色素，否則色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。
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