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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

Plasmid Mini Kit II(5)
點(diǎn)擊次數(shù):1132 更新時(shí)間:2017-10-18

質(zhì)粒小量提取試劑盒II型,Plasmid Mini Kit II(5)使用說明書

上海遠(yuǎn)慕詳細(xì)為您介紹美國Omega系列產(chǎn)品的用途,性能,操作步驟,注意事項(xiàng)等資訊,本司為Omega代理商,其系列有:96孔磁珠質(zhì)粒小量提取試劑盒,磁珠無內(nèi)毒素小量提取試劑盒,膠回收/PCR純化試劑盒,聚丙烯酰胺凝膠RNA純化試劑盒,PCR純化試劑盒,96孔板PCR產(chǎn)物純化試劑盒,超薄柱型PCR產(chǎn)物純化試劑盒,其他系列等,了解更多Omega產(chǎn)品詳情請(qǐng)!

 

名稱:質(zhì)粒小量提取試劑盒II型

品牌:Omega

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

英文名/型號(hào):Plasmid Mini Kit II(5)

用途:從小于15ml培養(yǎng)過夜的菌液提取50-70ug高純度質(zhì)粒DNA

質(zhì)粒小量提取試劑盒II型,Plasmid Mini Kit II(5)使用說明書

Plasmid Mini Kit II(5)特性與優(yōu)點(diǎn):
安全-無酚lvfang等危險(xiǎn)的有機(jī)物抽提
可靠-操作簡單,每次都能獲得理想的效果
快速-可在35分鐘內(nèi)完成一次抽提工作
方便-用小型柱就可以獲得較大量的質(zhì)粒DNA

 

 

質(zhì)粒小量提取試劑盒II型操作流程:

1.取過夜菌1.5毫升,5000g離心1分鐘收集細(xì)菌沉淀,棄上清。再重復(fù)一次,每管共收集3毫升過夜菌沉淀。通常大腸桿菌宜用LB培養(yǎng)過夜(16小時(shí)左右)至OD值為2-4。建議5000g(通常為5000rpm左右)室溫離心1分鐘,如沉淀不充分則適當(dāng)延長離心時(shí)間。時(shí)間過長或離心速度過快會(huì)使沉淀過于緊密,不利于加入溶液I后散開沉淀。直接倒掉上清,再倒入約1.5毫升菌液并重復(fù)上述操作,然后倒置于吸水紙上(可用普通草紙),使液體流盡。如果細(xì)菌密度明顯偏低,可考慮使用更多菌液,再重復(fù)上述操作1-2次。對(duì)于高拷貝質(zhì)粒所用菌量一般不能超過5毫升,對(duì)于低拷貝質(zhì)粒所用菌量一般不能超過10毫升。過量的細(xì)菌會(huì)導(dǎo)致后續(xù)的裂解不充分。


2.每管加入250微升溶液I,重懸細(xì)菌沉淀。確保沉淀*散開,無可見細(xì)菌團(tuán)塊。確認(rèn)溶液I中已經(jīng)添加了RNase A。速度vortex 5-10秒或更長時(shí)間,懸起沉淀。一定要充分混勻,對(duì)著光亮處觀察應(yīng)呈
均勻的懸濁液,無明顯細(xì)菌團(tuán)塊或絮塊。如果沒有vortex,可以用槍吹打沉淀使沉淀逐漸散開或用手指把沉淀彈開。


3.每管加入250微升溶液II,輕輕顛倒離心管4-6次,使細(xì)菌*裂解,溶液透明。切勿vortex!vortex或其它劇烈操作會(huì)導(dǎo)致基因組DNA斷裂,易導(dǎo)致*終所得質(zhì)粒被基因組DNA污染。顛倒4-6次后,溶液應(yīng)變得透明,無團(tuán)塊或絮狀物。如果加入溶液I后細(xì)菌沒有*散開,那么顛倒4-6次后,可能還會(huì)有團(tuán)塊或絮狀物。遇到有少量團(tuán)塊或絮狀物產(chǎn)生的情況,可以增加顛倒次數(shù)3-5次,再室溫放置2-3分鐘,但總裂解時(shí)間不可超過5分鐘。


4.每管加入350微升溶液III,隨即顛倒離心管4-6次混勻,可見白色絮狀物產(chǎn)生。切勿vortex!顛倒次數(shù)也不宜過多,否則易導(dǎo)致*終所得質(zhì)粒的質(zhì)量下降。


5.速(13,000rpm左右)室溫離心10分鐘。離心后會(huì)產(chǎn)生白色沉淀。離心時(shí)準(zhǔn)備好下一步需使用的質(zhì)粒純化柱,廢液收集管,并在純化柱上做好標(biāo)記。


6.將上一步驟離心后的上清倒入或吸入到質(zhì)粒純化柱內(nèi)。速離心30-60秒,倒棄收集管內(nèi)液體。質(zhì)粒倒入質(zhì)粒純化柱后,可以不用等待,直接離心。倒棄收集管內(nèi)的液體后,保留收集管繼續(xù)使用。


7.在質(zhì)粒純化柱內(nèi)加入750微升溶液IV,速離心30-60秒,洗去雜質(zhì),倒棄收集管內(nèi)液體。加入溶液IV后可以不用等待,直接離心。倒棄收集管內(nèi)的液體后,保留收集管繼續(xù)使用。


8.速再離心1分鐘,除去殘留液體并使痕量乙醇*揮發(fā)。
注意:倒棄收集管內(nèi)液體后再離心,才能*去除微量的溶液IV。微量的溶液IV會(huì)影響質(zhì)粒的質(zhì)量。


9.將質(zhì)粒純化柱置于1.5毫升離心管上,加入50微升溶液V至管內(nèi)柱面上,放置1分鐘。溶液 V 需要直接加至管內(nèi)柱面中央,使液體被純化柱吸收。如果不慎將溶液 V 沾在管壁上,一定要震動(dòng)管子,使液體滑落到管底,以便被純化柱吸收。也可以用重蒸水或 MiliQ 級(jí)純水替代溶液 V,但是水的 pH 應(yīng)不小于 6.5。溶液 V 加入后放置時(shí)間稍長,對(duì)于增加質(zhì)粒產(chǎn)量會(huì)略有幫助。


10.速離心1分鐘,所得液體即為高純度質(zhì)粒。
通常所得質(zhì)粒濃度為0.1-0.3mg/ml左右。如果想得到高濃度的質(zhì)粒,可以采用常規(guī)的乙醇沉淀方法濃縮質(zhì)粒。


 

該試劑盒專門為提供較大量的質(zhì)粒而設(shè)計(jì),硅膠柱結(jié)合質(zhì)粒能力是I型的兩倍。適合于從5-15ml培養(yǎng)過夜的細(xì)菌培養(yǎng)液中抽提高達(dá)70µg的質(zhì)粒DNA,*小量抽提與中量抽提之間的空白。純化的質(zhì)粒可以直接用于自動(dòng)測序、限制性內(nèi)切酶酶切以及PCR 、標(biāo)記以及體外轉(zhuǎn)錄等實(shí)驗(yàn)。

 

標(biāo)簽:Plasmid Mini Kit II(5)   質(zhì)粒小量提取試劑盒II型    質(zhì)粒小量提取試劑盒

 

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