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上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司

Plasmid Mini Kit I(100)
點(diǎn)擊次數(shù):2190 更新時(shí)間:2017-10-13

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名稱:質(zhì)粒小量提取試劑盒I型

品牌:Omega

供應(yīng)商:上海遠(yuǎn)慕

系列:質(zhì)粒小量提取試劑盒

型號(hào):Plasmid Mini Kit I(100)

貨號(hào):D6943-01

用途:從小于5ml培養(yǎng)過(guò)夜的細(xì)菌培養(yǎng)液中純化約35ug質(zhì)粒DNA

質(zhì)粒小量提取試劑盒I型,Plasmid Mini Kit I(100)

質(zhì)粒小量提取試劑盒特性與優(yōu)點(diǎn):
安全-無(wú)酚lvfang等危險(xiǎn)的有機(jī)物抽提
簡(jiǎn)單-硅膠柱過(guò)濾操作
快速-在30分鐘內(nèi)完成多個(gè)樣品的抽提工作
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質(zhì)粒小量提取試劑盒I型,Plasmid Mini Kit I(100)操作步驟:

1、取1-5ml細(xì)菌培養(yǎng)物,12000rpm離心1min,盡量吸除上清(菌液較多時(shí)可以通過(guò)多次離心將菌體沉淀收集到一個(gè)離心管中)。

2、向留有菌體沉淀的離心管中加入250ul溶液Ⅰ(請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA),使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。

3、向離心管中加入250ul溶液Ⅱ,溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次使菌體讓其裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細(xì)菌基因組DNA,此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠,作用時(shí)間不要超過(guò)5min,以免質(zhì)粒受到破壞。

4、向離心管中加入350ul溶液Ⅲ,立即溫和地上下翻轉(zhuǎn)6-8次,充分混勻,此時(shí)會(huì)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。12000rpm離心10min,用移液器小心地將上清轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的離心管中,盡量不要吸出沉淀。注意:溶液Ⅲ加入后應(yīng)立即混合,避免產(chǎn)生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀,可再次離心后取上清。

5、將上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱加入收集管中),室溫放置2min,12000rpm離心1min,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

6、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水yichun),12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

7、向吸附柱中加入500ul漂洗液,12000rpm離心1min,棄廢液,將吸附柱放入收集管中。

8、12000rpm離心2min,將吸附柱敞口置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘,目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,否則漂洗液中的乙醇會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)如酶切、PCR等。

9、將吸附柱放入一個(gè)干凈的離心管中,向吸附膜中央懸空滴加50-200ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液,室溫放置2min,12000rpm離心1min。

10、為了增加質(zhì)粒的回收效率,可將得到的洗脫液重新加入吸附柱中,室溫放置2min,12000rpm離心1min。 

 

 

質(zhì)粒小量提取試劑盒I型注意事項(xiàng):

1.使用前請(qǐng)先檢查溶液Ⅱ和溶液Ⅲ是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ和漂洗液使用后應(yīng)立即擰緊蓋子。

2.洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50ul,體積過(guò)小影響回收效率;洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍),pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率,DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防DNA降解。

3.如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?;虼笥?0kb的大質(zhì)粒,應(yīng)加大菌體使用量,使用5-10ml過(guò)夜培養(yǎng)物,同時(shí)按照比例增加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ的用量,吸附和洗脫時(shí)可以適當(dāng)?shù)难娱L(zhǎng)時(shí)間,以增加提取效率。

 

 

標(biāo)簽:質(zhì)粒小量提取試劑盒I型   Plasmid Mini Kit I(100)   質(zhì)粒小量提取試劑盒   質(zhì)粒提取試劑盒

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